1 適用范圍

1.1 本標準適用于生物(動物：如禽、畜、魚、蚯蚓；植物：如糧食、水果、蔬菜、茶、藕)中六六六、滴滴涕的分析。

1.2 本法采用丙酮-石油醚提取，以濃硫酸凈化，用帶電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定。

1.3 本方法的最低檢測濃度為0.00004～0.00487mg／kg。

2 試劑和材科

2.1 載氣

氮氣，純度99.99％，經(jīng)去氧管過濾，氧的含量小于5ppm，氫的含量小于1.0ppm。

2.2 配制標準樣品和試樣預處理時使用的試劑和材料

使用的試劑系分析純，有機溶劑經(jīng)重蒸，濃縮20倍用氣譜測定無干擾峰。

2.2.1 色譜標準樣品：α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、p，p／ -DDE、o，p / -DDT、p，p / -DDD、p，p / -DDT，含量98％～99％，色譜純。

2.2.2 石油醚：沸程60～90℃。

2.2.3 丙酮(CH3 COCH 3 )。

2.2.4 異辛烷(C8 H 18 )。

2.2.5 苯(C6 H 6 )：優(yōu)級純。

2.2.6 濃硫酸(H2 SO 4 )：密度為1.84。

2.2.7 發(fā)煙硫酸(H2 SO 4 ·xSO 3 )。

2.2.8 高氯酸(HClO4 )：優(yōu)級純。

2.2.9 冰乙酸(CH3 COOH)。

2.2.10 無水硫酸鈉(Na2 SO 4 )：在300℃烘箱中烘烤4h，備用。

2.2.11 硫酸鈉溶液：20g／L。

2.2.12 硅藻土：試劑級。

2.2.13 三氯甲烷(CHCl3 )。

2.2.14 助濾劑Celite545。

2.2.15 脫脂棉(或玻璃棉)：用丙酮回流16h，取出晾干后備用。

2.2.16 消化液：將60％高氯酸及冰乙酸等體積混合。

2.3 制備色譜柱時使用的試劑和材料

2.3.1 色譜柱和填充物(3.6.5)。

2.3.2 涂漬固定液所用溶劑三氯甲烷(2.2.13)。

3 儀器

3.1 主要儀器：帶電子捕獲檢測器的氣相色譜儀。

3.2 控制裁氣的壓力表及流量計。

3.3 進樣器：全玻璃系統(tǒng)進樣器。

3.4 記錄器：與儀器相匹配的記錄儀。

3.5 檢測器。

3.5.1 類型：電子捕獲檢測器。

3.5.2 器件的特征：可采用63Ni放射源或高溫3H放射源。

3.5.3 檢測器極化電壓可采用直流電源或脈沖電源。

3.6 色譜柱。

3.6.1 色譜柱數(shù)量：2～3支。

3.6.2 色譜柱持征：

3.6.2.1 材料：硬質(zhì)玻璃。

3.6.2.2 尺寸：長1.8～2.0m，內(nèi)徑2～3mm。

3.6.3 色譜柱類型：螺旋狀填充柱。

3.6.4 色譜柱面處理：經(jīng)水沖洗后，在玻璃柱管內(nèi)注滿熱洗液(60～70℃)。浸泡4h，然后用水沖洗至中性，再用蒸餾水沖洗，烘干后進行硅烷化處理，將6％～10％的二氯二甲基硅烷甲醇溶液注滿玻璃柱管，浸泡2h，然后用甲醇清洗至中性烘干備用。

3.6.5 填充物。

3.6.5.1 載體：chromosorb W AW-DMCS或者chromosorb W AW-DMCS-HP，80～100目。

3.6.5.2 固定液：OV-17(甲基硅酮)，最高使用溫度350℃；QF-1或OV-210(三氯丙基甲基硅酮)，最高使用溫度250℃或275℃。

3.6.5.2.1 液相載荷：OV-17為1.5％；OV-210或QF-1為1.95％。

3.6.5.2.2 涂漬固定液的方法，根據(jù)擔體的重量稱取一定量的固定液，溶在三氯甲烷中，待完全溶解后，倒入盛有擔體的燒杯中，再向其中加入三氯甲烷(2.2.10)至波面高出1～2cm，搖勻后浸2h。然后在紅外燈下將溶劑揮發(fā)干或在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上慢速蒸干。再置于120℃烘箱中，放置4h后備用。

3.6.5.3 色譜柱的填充方法：將色譜柱的一端(接檢測器)用硅烷化玻璃塞住，接真空泵，另一端接一漏斗，開動真空泵后將固定相徐徐傾入色譜柱內(nèi)，并輕輕拍打色譜柱，使固定相在色譜柱內(nèi)填充緊密，至固定相不再拍入柱內(nèi)為止，裝填完畢后，用硅烷化玻璃棉塞住色譜柱另一端。

3.6.5.4 色譜柱的老化：將填充好的色譜柱進口按正常接在汽化室上，出口空著不接檢測器，先用較低載氣流速，在略高于實際使用溫度而不超過固定液的使用溫度下處理4～6h，然后逐漸提高載氣流速老化24～48h，再降低至使用溫度，接上檢測器后，如基線穩(wěn)定即可使用。

3.6.6 柱效能：在給定條件色譜柱總分離效能即分離度要求不小于90％。

3.7 試樣預處理時使用的儀器：

3.7.1 樣品瓶：適宜的玻璃磨口瓶。

3.7.2 蒸發(fā)濃縮器。

3.7.3 脂肪提取器。

3.7.4 水浴鍋。

3.7.5 振蕩器。

3.7.6 萬能粉碎機。

3.7.7 組織搗碎機。

3.7.8 真空泵。

3.7.9 玻璃器皿：250mL、500mL分液漏斗，100、250、300mL具塞錐型瓶，500mL抽濾瓶，直徑7～9cm布氏漏斗，直徑0.6～1.0cm，長20cm玻璃層析柱，50、100mL量筒，250mL平底燒瓶，10、20mL刻度試管(經(jīng)標定)，研缽。

3.7.10 微量注射器：5μL、10μL。

3.7.11 離心機。

4 樣品

4.1 樣品性質(zhì)

4.1.1 樣品名稱：禽畜烏獸肉、魚肉、蚯蚓、糧食、果蔬、茶、藕。

4.1.2 樣品狀態(tài)：固體。

4.1.3 樣品的穩(wěn)定性，在4.1.1各種樣品中六六六、滴滴涕化學性質(zhì)穩(wěn)定。

4.2 樣品的采集

4.2.1 禽畜(包括鳥獸)樣：家禽取1～3只殺好的，從脊背切開，取其整體一半，去骨骼，然后搗碎，混勻，備用。家畜，根據(jù)測試目的，取具有代表性的樣品0.5～1.0kg，搗碎，混勻，備用。

4.2.2 魚樣：去鱗、鰭、內(nèi)臟，沿脊背縱剖后取其二分之一或數(shù)分之一(50g以下者取整體)，剔刺，用濾紙吸干表面水，取20條切碎，混勻，備用。

4.2.3 蚯蚓樣：從田間采集蚯蚓20～50條，在玻璃器皿中自然排泥2天(皿底墊濾紙加水濕潤)，然后洗凈，用濾紙吸干表面水，取20條切碎，混勻，備用。

4.2.4 糧食樣：采取500g具代表性的(小麥、稻米、玉米等)樣品，粉碎，過40目篩混勻，裝入樣品瓶(3.7.1)備用。

4.2.5 果蔬、藕樣：取其代表性的新鮮果蔬、藕的可食部位1.0kg，切碎，取200g測水分含量，其余供試驗用。

4.2.6 茶葉樣：鮮樣同4.2.5，干樣同4.2.4。

4.3 樣品的保存

4.3.1 生物樣品，采集后應盡快分析，如暫不分析可保存在－18℃冷凍箱中。

4.4 試佯的預處理

4.4.1 提取

4.4.1.1 糧食樣品的提取

4.4.1.1.1 A法：準確稱取10g樣品(4.2.4)，置于250mL具塞三角瓶中，加入60mL石油醚浸泡過夜，將上清液轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中，再用40mL石油醚分兩次洗滌三角瓶及樣品，合并洗滌液于分液漏斗中，待凈化。

4.4.1.1.2 B法：準確稱取10g樣品(4.2.4)置于250mL具塞三角瓶中，加100mL石油醚，于電動振蕩器上振蕩1h，提取液轉(zhuǎn)移入250mL離心杯中(每次用20mL石油醚洗滌三角瓶后，倒入離心杯中離心10min)，上清液合并于分液漏斗中，待凈化。

4.4.1.2 果蔬、水生植物樣(藕)的提取

4.4.1.2.1 A法：準確稱取200g樣品(4.2.5)置于組織搗碎機缸(3.7.7)內(nèi)，快速搗碎1～2min，稱取勻漿50g，置于250mL三角瓶中，加丙酮100mL，振搖1min，浸泡1h后過濾入500mL分液漏斗中，殘渣用30mL丙酮分三次洗滌，洗滌液合并于分液漏斗中，然后加入10mL石油醚，振搖1min，靜止分層后，將下層丙酮水溶液移入另一500mL分液漏斗中，用50mL石油醚再提取一次，用20mL洗滌分液漏斗，并加入提取液中，而后加200mL(2.2.11)硫酸鈉溶液，振搖1min，靜置分層，棄去下層丙酮水溶液、石油醚提取液，待凈化。

4.4.1.2.2 B法：準確稱取鮮樣50g，加25g無水硫酸鈉，于組織搗碎機缸中，加入丙酮80mL，石油醚20mL，快速搗碎2min，漿液經(jīng)裝有助濾劑545的布氏漏斗抽濾，然后用丙酮10×3mL沖洗殘渣直至濾液近無色止。濾液移入500mL分液漏斗中，加100mL(2.2.11)硫酸鈉溶液振搖1min，靜止分層后，棄去水層，待凈化。

4.4.1.3 茶葉樣品的提取

準確稱取5g茶葉樣(4.2.6干樣)，放入100mL具塞三角瓶中，加入22mL正已烷，3mL丙酮，振搖0.5h后浸泡過夜，而后用裝有玻璃纖維的漏斗過濾，下接25mL容量瓶，用正已烷定容，然后取5mL(相當于1g茶葉樣)，待凈化。

4.4.1.4 禽、畜(包括鳥獸)、魚、蚯蚓樣的提取

4.4.1.4.1 A法(消煮法)：準確稱取樣品(4.2.1；4.2.2)2～5g，置于150mL具塞三角瓶中，加入消化液：60％HClO4 —冰乙酸(1:1， V／V )40mL，蓋好玻璃塞，靜置冷消化液(12h以上)。然后在85～90℃水浴中熱消解3h；待冷卻后加石油醚10mL，振搖2min，靜止分層后用細嘴滴管將石油醚層移入250mL分液漏斗中。再以20mL石油醚分兩次重復提取(最后一次在三角瓶中緩緩加入蒸餾水至瓶頸)。吸盡石油醚浮層，合并三次提取液于分液漏斗中，待凈化。

4.4.1.4.2 B法(索氏提取法)：適用于樣品量不大又易碎的動物內(nèi)臟，昆蟲、蚯蚓等小動物(4.2.3)。準確稱取均樣2～5g放入研缽中，加入10～25g無水硫酸鈉(2.2.10)研成粉狀，裝入濾紙筒內(nèi)，放入索氏提取器中，用80mL石油醚浸泡過夜后，抽提4～5h，冷卻后將提取液轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，在室溫下用石油醚定容至刻度。

4.4.2 凈化

4.4.2.1 A法(濃硫酸凈化法)：適用于土壤、糧食、果蔬、水生植物及動物肉類樣品。在盛有石油醚提取液的分液漏斗中，按提取液體積的十分之一數(shù)量加入濃硫酸，振搖1min，靜置分層后，棄去硫酸層(注意：用硫酸凈化過程中，要防止發(fā)熱爆炸，加硫酸后，開始要慢慢振搖，不斷放氣，然后劇烈振搖)，按上述步驟重復數(shù)次，直至加入的石油醚提取液二相界面清晰均呈無色透明時止，然后向石油醚提取液中加入其體積量一半左右的硫酸鈉液，振搖十余次，將其靜置分層后棄去水層，如此重復至提取液呈中性時止(一般2～4次)。石油醚提取液再經(jīng)過裝有2～3g無水硫酸鈉的筒型漏斗脫水，濾入適當規(guī)格的容量瓶中，定容，供氣相色譜測定。

4.4.2.2 B法(酸性硅藻土柱層析法)：適用于茶葉、蚯蚓等小動物及動物內(nèi)臟樣品。取內(nèi)徑0.8～1.0cm，長18～20cm干燥的層析柱，柱底端塞上少量玻璃棉。加約2cm厚的無水硫酸鈉，再裝入3～4g新調(diào)制的酸性硅藻土(10g硅藻土加3mL發(fā)煙硫酸，拌勻后，再加3mL濃硫酸拌勻，即可)，上面再裝2cm厚無水硫酸鈉，用橡皮錘子輕輕敲打柱子，使其松緊適度。取待凈化的提取液置于K-D濃縮器中濃縮到1～2mL，傾入裝好的層析柱中，承接適當規(guī)格的容量瓶收集淋洗液。待層析柱中提取液剛進入無水硫酸鈉層后，用與提取液相同的溶劑(石油醚或正已烷)反復淋洗層析柱，直到容量瓶收集到定容體積為止，供氣相色譜測定。

5 色譜測定操作

5.1 儀器的調(diào)整

5.1.1 汽化室溫度：220℃。

5.1.2 柱溫度：195℃。

5.1.3 檢測器溫度：245℃。

5.1.4 載氣流速：40～70mL／min，根據(jù)儀器的情況選用。

5.1.5 記錄儀紙速：5mm／min。

5.1.6 衰減：根據(jù)樣品中被測組分含量適當調(diào)節(jié)記錄器衰減。

5.2 校準

5.2.1 定量方法

外標法。

5.2.2 標準樣品

5.2.2.1 使用次數(shù)：使用標準樣品周期性的重復校準。視儀器的穩(wěn)定性決定周期長短，若儀器穩(wěn)定，可測定4～5個試樣校準一次。

5.2.2.2 標準樣品的制備：準確稱取一定量的色譜純標準樣品每種(2.2.1)100mg，溶于異辛烷(2.2.4)(β-六六六先用少量苯溶解)，在容量瓶中定容100mL，在4℃下貯存。

5.2.2.3 中間溶液：用移液管量取八種儲備液，移至100mL容量瓶中，用異辛烷稀釋至刻度，八種儲備液取的體積比為：Vα-六六六 ：V γ-六六六 ：V β-六六六 ：V δ-六六六 ：V p，p/-DDE ：V o，p/-DDT ：V p，p/-DDD :V p，p/-DDT =1:1:3.5:1:3.5:5:3:8。

5.2.2.4 標準工作液的配制：根據(jù)檢測器的靈敏度及線性要求，用石油醚(2.2.2)稀釋中間溶液，配制成幾種濃度的標準工作液，在4℃下貯存。

5.2.2.5 氣相色譜中使用標準溶液的條件：

5.2.2.5.1 標準樣品的進樣體積與試樣進樣體積相同，標準樣品的響應值接近試樣的響應值。

5.2.2.5.2 調(diào)節(jié)儀器重復性條件：一個樣品連續(xù)注射進樣兩次，其峰高相對偏差不大于7％，即認為儀器處理于穩(wěn)定狀態(tài)。

5.2.2.5.3 標準樣品與試樣盡可能同時進祥分析。

5.2.3 校準數(shù)據(jù)的表示

試樣中組分按式(1)校準：

式中：X i —— 試樣中組分i的含量，mg／kg；

Ei —— 標準溶液中組分i的含量，mg／kg；

Ai —— 試樣中組分i的峰高，cm(或峰面積cm 2 )；

AE — —標準溶液中組分i的峰高，cm(或峰面積cm 2 )。

5.3 進樣試驗

5.3.1 進樣

5.3.1.1 進樣方式：注射進樣。

5.3.1.2 進樣量：一次進樣量3～5μL。

5.3.1.3 操作：用清潔注射器(3.7.10)在待測樣品中抽吸幾次，排除所有氣泡后，抽取所需進樣體積，迅速注射入色譜儀中，并立即拔出注射器。

5.4 色譜圖的考察

5.4.1 標準色譜圖

六六六、滴滴涕氣相色譜圖

1－α-六六六；2－γ-六六六；3—β-六六六；4－δ-六六六；5－p，p/ -DDE；

6—o，p／ -DDT； 7—p，p ／ -DDD；8—p，p ／ -DDT

5.4.1.1 柱填充劑：1.5％OV-17＋1.95％QF-1／chromosnrb W AW-DMCS，80～100目；或1.5％OV-17＋1.95％OV-210／chromosorb W AW-DMCS-HP，80～100目。

5.4.1.2 載氣：氮氣，40～70mL／min。柱溫185～195℃。

5.4.2 定性分析

5.4.2.1 組分的出峰次序：α-六六六、γ-六六六、β-六六六、δ-六六六、p，p/ -DDE、o，P / -DDT、p，p / -DDD、p，p / -DDT。

5.4.2.2 檢驗可能存在的干擾，采用雙校定性。用1.5％OV-17＋1.95％QF-1／chromosorb W AW-DMCS，80～100目色譜住測定后，再用1.5％OV-210／chromosorb W AW-DMCS-HP，80～100目色譜柱在相同條件下進行確準檢驗色譜分析，可確定各組分及有無干擾。

5.4.3 定量分析

5.4.3.1 色譜峰的測量

以峰的起點和終點的聯(lián)線作為峰底，以峰高極大值對時間軸作垂線，對應的時間即為保留時間，此線從峰頂至峰底間的線段即為峰高。

5.4.3.2 計算

式中：R i —— 樣品中i組分農(nóng)藥的含量，mg／kg；

hi —— 樣品中i組分農(nóng)藥的峰高，cm(或峰面積cm 2 )；

Wis —— 標樣中i組分農(nóng)藥的絕對量，ng(或峰面積cm 2 )；

V——G(g)樣品定容體積，mL；

his —— 標樣中i組分農(nóng)藥的峰高，cm；

Vi — —樣品的進樣量，μL；

G——樣品的重量，g。

6 結(jié)果的表示

6.1 定性結(jié)果

根據(jù)標準色譜圖各組分的保留時間來確定被測試樣中出現(xiàn)的組分數(shù)目和組分名稱。

6.2 定量結(jié)果

6.2.1 含量的表示方法：根據(jù)5.4.3.2計算出的各組分的含量，以mg／kg表示。

附加說明：

本標準由國家環(huán)境保護局科技標準司和農(nóng)業(yè)部環(huán)能司提出。

本標準由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所負責起草。

本標準主要起草人黃士忠、馮秀瓊、姚建仁、袁秀文、萬兆良、陳國光、王繼軍、李治祥、張俊亭。